Иммуноэлектрофорез, его основные разновидности
Иммуноэлектрофорез (ИЭФ) — метод исслед-я антигенного состава биологических материалов, сочетающий электрофорез и иммунодиффузию. Впервые описан Грабаром и Уильямсом в 1953 году, в 1965 году метод был модифицирован.
Образец антигенного материала разделяют электрофорезом в геле (агарозном), в рез-те чего форм характерные зоны. Далее параллельно зонам электрофореза вносится преципитирующая антисыворотка, антигены и антисыворотка диффундируют навстречу друг к другу, и в месте встречи антисыворотки с антигеном появляются линии преципитации, им форму дуги. После провед-я иммунодиффузии и элюирования непреципитировавших молекул из геля гель окрашивают специальными красителями (амидочёрным 10В, азокармином В и др красителями,окраш белки в случае белковых антигенов или суданом чёрным В в случае липопротеиновыхантигенов). Сущ также ряд модификаций метода ИЭФ (при пом чистого антигена, при пом моноспец антисыворотки, метод по Оссерману, метод ИЭФ по Геремансу.С пом данного метода в клинической иммунологии определяют концентрацию Ig и идентифиц миеломные белки.
Встречный иммуноэлектрофорез может примен для опред антигенов, мигрирующих в агаре к положительнозаряж электроду. Его применяют для идентификации антигенов вируса гепатита В и соответствующих антител, антител к ДНК при системной красной волчанке, аутоантител к растворимым ядерным антигенам при коллагенозах, а также антител (преципитинов) к Aspergillus при аллергическом бронхолегочном аспергиллезе.
Ракетный электрофорез-это колич метод, предусматривающий внесение антигена в гель, содерж антитела. Линия преципитации имеет форму ракеты , длина которой определяется концентрацией антигена. Как и встречный электрофорез, это-быстрый метод, но и здесь антиген должен перемещаться к положительно заряженному электроду. Таким образом, ракетный электрофорез подходит для белков, например альбумина, трансферрина и церулоплазмина, в то время как концентрацию иммуноглобулинов обычно определяют методом простой радиальной иммунодиффузии.
Один из наиболее удачных вариантов ракетного электрофореза - двухмерный или перекрестный иммуноэлектрофорез Лорелла. При этом на первом этапе смесь антигенов электрофоретически разделяют в геле агарозы.Затем разделенные белки вновь заставляют диффундировать в геле под влиянием электрического поля в другом
Виды иммуноэлектрофореза А- простой иммуноэлектрофорез; Б- встречный иммуноэлектрофорез; В - ракетный иммуноэлектрофорез; Г - двумерный иммуноэлектрофорез.