Шпаргалки к экзаменам и зачётам

студентам и школьникам

  • Increase font size
  • Default font size
  • Decrease font size

Основы иммунологии - Методы иммунофлюоресценции

Cмотрите так же...
Основы иммунологии
Предмет, цели и задачи иммунологии
Общая характеристика иммунной системы млекопитающих
Строение и характеристика центральных и периферических органов иммунной системы
Понятие об иммунитете. Естественный иммунитет. Активная и пассивная формы иммунитета.
Искусственный иммунитет и его роль в борьбе с инфекционными заболеваниями. Понятие о вакцинах и сыворотках, применяемых для профилактики инфекционных болезней
Конститутивные и индуцибельные защитные механизмы организма млекопитающих от инфекции.
Защитная функция кожи и слизистых оболочек млекопит-х.
Роль нормальной микрофлоры человека в защите от инфекции.
Развитие и характеристика фагоцитирующих клеток млекопитающих
Процесс фагоцитоза. Механизмы инактивации микроорганизмов фагоцитами.
Система комплемента, пути ее активации и механизм действия.
Общая характеристика иммунного ответа на тимусзависимые антигены, его этапы и конечный результат.
Развитие и характеристика антигенпредставляющих клеток, их локализация в организме
Процессинг антигена, его значение в развитии иммунного ответа
Т-лимфоциты, их развитие и локализация. Т-хелперы и их роль в развитии иммунного ответа на тимусзависимые антигены
В-лимфоциты, их развитие и локализация. Плазматические клетки и продукция антител
Иммунологическая память. Первичный и вторичный иммунный ответ
Характер взаимодействий антигенпредставляющих клеток
Понятие об антигенах. Общие свойства антигенов. Полные и неполные антигены.
Классификация антигенов по происхождению. Типы антигенной специфичности
Зависимость антигенных свойств от молекулярной структуры.
Классификация антигенов по происхождению. Типы антигенной специфичности
Функции Fаb- и Fс-частей молекулы иммуноглобулина
Генетические механизмы формирования специфичности иммуноглобулинов и переключения клеток на синтез иммуноглобулинов определенного класса
Паратоп и эпитоп. Характер взаимодействия антиген-антитело. Аффинитет и авидность
Агглютинация и преципитация. Реакции агглютинации и преципитации, применяемые в биологии и медицине
Иммуноэлектрофорез, его основные разновидности
Методы иммунофлюоресценции
Иммуноферментный анализ
Иммуноблотинг
реакции с участием комплимента.
Реакции нейтрализации, реакция опсонизации
Анафилаксия, анафилактический шок, сывороточная болезнь. Механизм возникновения гиперчувствительности немедленного типа. Аллергия и аллергены
Гиперчувствительность замедленного типа и механизмы ее развития
All Pages


 Методы иммунофлюоресценции


Иммунофлюоресценциязаключается в использовании меченных флюорохромом антител, точнее, иммуноглобулиновой фракции антител lgG. Меченное флюорохромом антитело образует с антигеном комплекс антиген — антитело, который становится доступным наблюдению под микроскопом в УФ-лучах, возбуждающих свечение флюорохрома. Реакцию прямой иммунофлюоресценции используют для изучения клеточных антигенов, выявления вируса в зараженных клетках и обнаружения бактерий и риккетсий в мазках. Так, для диагностики бешенства отпечатки кусочков мозга животных, подозреваемых на вирусоносительство, обрабатывают люминесцирующей антирабической сывороткой. При положительном результате в цитоплазме нервных клеток выявляются глыбки ярко-зеленого цвета. На обнаружении антигенов вирусов в клетках отпечатков со слизистой оболочки носа основана экспресс-диагностика гриппа, парагриппа и аденовирусной инфекции.

Более широко применяют метод непрямой иммунофлюоресценции. основанный на выявлении комплекса антиген — антитело с помощью люминесцирующей иммунной сыворотки против lgG-антител и используемой для обнаружения не только антигенов, но и титрования антител. Метод нашел применение в серодиагностике герпеса, цитомегалии, лихорадки Ласса. Препараты с наслоенной исследуемой сывороткой крови помещают в термостат при 37° для образования иммунных комплексов, а затем после отмывания несвязавшихся реагентов выявляют эти комплексы меченой люминесцирующей сывороткой против глобулинов человека. Применяя меченые иммунные сыворотки против lgM- или lgG-антител, можно дифференцировать тип антител и обнаруживать ранний иммунный ответ по наличию lgM-антител.

Иммунофлюоресценцию широко используют не только в бактериологии, вирусологии, паразитологии, но и в иммунопатологии для обнаружения антител к тканевым антигенам человека.

 

Радиоиммунологический анализ

Радиоиммунологический метод основан на применении радиоизотопной метки антигенов или антител. Является наиболее чувствительным методом определения антигенов и антител, используется для определения гормонов, лекарственных веществ и антибиотиков, для диагностики бактериальных, вирусных, риккетсиозных, протозойных заболеваний, исследования белков крови, тканевых антигенов. Первоначально он был разработан как специфический метод измерения уровня циркулирующих в крови гормонов. Тест-системой являлись меченный радионуклидом гормон (антиген) и антисыворотка к нему. Если к такой антисыворотке добавить материал, содержащий искомый гормон, то он свяжет часть антител, при последующем внесении меченого титрованного гормона с антителами свяжется уменьшенное по сравнению с контролем его количество. Результат оценивают по сопоставлению кривых связанной и несвязанной радиоактивной метки. Эта разновидность метода носит название конкурентной реакции. Существуют и другие модификации радиоиммунологического метода.

Радиоиммунологический анализ. Принцип радиоиммунологического анализа (РИА) основан на выявлении комплекса антиген-антитело, в котором один из иммунореагентов был мечен радиоактивным изотопом. Обычно используют изотопы йода (I-125 и I-131). Учет реакции проводят по убыванию или по возрастанию радиоактивности (в зависимости от методики РИА) с помощью специальных счетчиков ионизирующего излучения. Метод высокочувствителен, но постепенно вытесняется иммуноферментным анализом, учитывая не безопасность работы с радиоактивными изотопами и необходимость в сложном регистрирующем оборудовании.

Разновидностью иммуноэлектрофореза является радиоиммунофорез В этом случае после электрофоретического разделения антигенов в канавку, вырезанную параллельно движению антигенов в геле, наливают сначала меченную радиоактивным йодом иммунную сыворотку против определяемых антигенов, а затем иммунную сыворотку против lgG-антител, которая преципитирует образовавшиеся комплексы антитела с антигеном. Все несвязавшиеся реагенты вымывают, а комплекс антиген — антитело обнаруживают методом авторадиографии.